Введение. Мицелиальный гриб Rhizopus stolonifer Vuillemin (1902), относящийся к семейству Mucoraceae (порядок Mucorales, отдел Zygomycota), является одним из наиболее вредоносных и распространенных возбудителей гнилей плодоовощной продукции. Его вредоносность обусловлена широкой распространенностью данного гриба практически во всех наземных экосистемах, а также способностью формировать столоны, обеспечивающие очень быструю колонизацию субстратов [1–3]. Гриб также известен как возбудитель плесневения семян, существенно ухудшающих их посевные качества [4–7]. В первые десятилетия XXI века R. stolonifer получил распространение в качестве возбудителя текучей гнили земляники садовой Fragaria × ananassa (Duchesne ex Weston) Duchesne ex Rozier (1785), поражающий плоды непосредственно на растениях еще до их созревания. Болезнь актуальна для всех производящих землянику регионов, при этом потери урожая могут достигать 50–90 % [8, 9]. В качестве одного из наиболее перспективных методов борьбы с R. stolonifer в настоящее время рассматривается биологический метод, основанный на использовании микроорганизмов-антагонистов R. stolonifer либо их метаболитов [3, 10–13].Цель исследования – проверка антибиотической активности представителей семейства Bacillaceae в отношении мицелиального гриба Rhizopus stolonifer Vuillemin (1902).Объекты и методы. Объектами исследования были штаммы Bacillus altitudinis, B. Atrophaeus, B. cereus, B. megaterium, B. simplex, B. subtilis, Peribacillus simplex и Bacillus sp. (в общей сложности 21 штамм), выделенные авторами из сельскохозяйственных почв Красноярского края и ризосферы сельскохозяйственных растений (табл. 1). В предыдущих исследованиях данные штаммы продемонстрировали высокую антибиотическую активность в отношении широкого спектра возбудителей грибных болезней сельскохозяйственных растений, а также в отношении возбудителей плесневения семян р.р. Aspergillus, Penicillium и Mucor. Таблица 1Список изучаемых штаммовList of studied strains ШтаммТаксономическая принадлежностьМетод идентификацииRSA2Bacillus altitudinisMALDI-TOF масс-спектрометрияCX6Bacillus atrophaeusMALDI-TOF масс-спектрометрияRSA1Bacillus atrophaeusПо нуклеотидной последовательности гена 16SpРНКRSA16(1)Bacillus atrophaeusПо нуклеотидной последовательности гена 16SpРНКRSA16(2)Bacillus atrophaeusMALDI-TOF масс-спектрометрияRSA18Bacillus atrophaeusПо нуклеотидной последовательности гена 16SpРНКRSA19Bacillus atrophaeusMALDI-TOF масс-спектрометрияRSA8Bacillus atrophaeusПо нуклеотидной последовательности гена 16SpРНКRSA9Bacillus atrophaeusMALDI-TOF масс-спектрометрияАЛ3Bacillus cereusMALDI-TOF масс-спектрометрияRSA17Bacillus cereus group /Bacillus subtilisMALDI-TOF масс-спектрометрияRSA4Bacillus megateriumMALDI-TOF масс-спектрометрияRSA15Bacillus simplexMALDI-TOF масс-спектрометрияPa1Bacillus sp.MALDI-TOF масс-спектрометрияPa2Bacillus sp.Культурально-морфологическийPa3Bacillus sp.MALDI-TOF масс-спектрометрияАл4Bacillus sp.Культурально-морфологическийRSA20(1)Bacillus subtilisMALDI-TOF масс-спектрометрияRSA20(2)Bacillus subtilisMALDI-TOF масс-спектрометрияRSA11Bacillus subtilis /Bacillus atrophaeusMALDI-TOF масс-спектрометрияRSA12Peribacillus simplexMALDI-TOF масс-спектрометрия  Оценку антибиотической активности изучаемых штаммов в отношении R. stolonifer проводили в чашках Петри методом встречных культур [14]. В качестве показателя антибиотической активности использовали площадь колонии R. stolonifer в присутствии штамма-антагониста в % от контрольного варианта (без антагониста) после 10 сут инкубирования при температуре (25 ± 1) °C. Измерения площади проводили по фотографиям чашек Петри с помощью программы ImageJ; повторность трехкратная.Статистическую значимость различий между штаммами по антибиотической активности в отношении R. stolonifer проверяли дисперсионным анализом. Связь антибиотической активности изучаемых штаммов с их активностью в отношении родственного R. stolonifer гриба Mucor sp., также относящегося к сем. Mucoraceae, проверяли ранговым коэффициентом корреляции Спирмена. В качестве программного обеспечения использовали пакет StatSoft STATISTICA 8.0.Результаты и их обсуждение. Влияние изучаемых штаммов на рост R. stolonifer варьировало от полного отсутствия антагонизма до почти полного подавления роста гриба. В ряде случаев после первоначального подавления роста R. stolonifer впоследствии возобновлял свой рост в присутствии бактериального штамма (рис. 1).Наибольший антагонистический эффект в отношении R. stolonifer проявил штамм RSA9 (рис. 2).    Рис. 1. Примеры воздействия изучаемых штаммов на R. stolonifer: 1 – контроль; 2 – отсутствие антагонизма со стороны изучаемого штамма; 3 – подавление роста R. stolonifer с последующим возобновлением его роста; 4 – практически полное подавление роста R. stolonifer без возобновления его роста Examples of the effects of the studied strains on R. stolonifer: 1 – control; 2 – absence of antagonism from the studied strain; 3 – suppression of the growth of R. stolonifer followed by the resumption of its growth; 4 – almost complete suppression of the growth of R. stolonifer without the resumption of its growth   Рис. 2. Площадь колоний R. stolonifer в присутствии изучаемых штаммов, % к контролю The area of colonies of R. stolonifer in the presence of the studied strains, % of the control  Дисперсионный анализ подтвердил статистическую значимость различий между изучаемыми штаммами по влиянию на R. stolonifer на уровне p < 0,001 (табл. 2).Не выявлено связи между антибиотическим действием изучаемых штаммов в отношении R. stolonifer и в отношении Mucor sp. (рис. 3). Коэффициент ранговой корреляции Спирмена Rs = 0,272, статистически незначим.Наибольшую антибиотическую активность в отношении R. stolonifer продемонстрировал штамм RSA9, в присутствии которого площадь колонии гриба составила лишь 8 % от контроля (см. рис. 1, 2).  Таблица 2Результаты дисперсионного анализа различий между штаммами по антагонистической активности в отношении R. stolonifer Results of a variance analysis of differences between strains in antagonistic activity against R. stolonifer Источник варьированияПоказатель силы влияния, %Статистическая значимость эффекта, pВсе штаммыШтамм99,720,000000Ошибка0,28 Только штаммы, проявившие антагонизмШтамм99,350,000000Ошибка0,65    Рис. 3. Результаты сопоставления антибиотической активности изучаемых штаммов в отношении R. stolonifer и в отношении Mucor sp.; числа по осям показывают ранг штамма по антибиотической активности в отношении соответствующего гриба; минимальному значению ранга соответствует максимальная антибиотическая активность The results of comparing the antibiotic activity of the studied strains against R. stolonifer and against Mucor sp.; the numbers along the axes show the strain&#39;s rank in terms of antibiotic activity againstthe corresponding fungus; the minimum value of the rank corresponds to the maximum antibiotic activity  Штамм RSA9 представлен подвижными палочковидными клетками, способными к образованию спор (эндоспор). В молодой культуре размер клеток 102,4–253,3 × 13,9–17,0 мкм, склонны к образованию цепочек. В зрелой культуре клетки 25,0–83,6 × 11,4–17,0 мкм, одиночные и в парах. Эндоспоры овальные, 16,8–26,4 × 9,6–12,9 мкм, образуются субтерминально; при образовании эндоспоры форма клетки не меняется. Прорастание эндоспоры латеральное (рис. 4).   Рис. 4. Штамм RSA9: 1 – прорастание споры (С – спора, В – вегетативная клетка, прорастающая спора показана стрелкой); 2 – клетки в молодой культуре; 3 – клетки в зрелой культуре; 4 – спорулирующие клетки (показаны стрелкой) Strain RSA9: 1 – spore germination (C – spore, B – vegetative cell, spore germination is shown by arrow); 2 – cells in young culture; 3 – cells in mature culture; 4 – sporulating cells (shown by arrow)  Методом MALDI-TOF масс-спектрометрии штамм идентифицирован как представитель вида Bacillus atrophaeus (см. табл. 1). Следует отметить, что другие штаммы того же вида проявили существенно более слабый антагонизм в отношении R. stolonifer. Площадь колоний гриба в присутствии этих штаммов варьировала от 20,9 % (штамм RSA1) до 62,4 % (RSA16(2) ) от контрольного варианта (см. рис. 2), статистическая значимость различий между штаммами B. atrophaeus по антибиотической активности в отношении R. stolonifer составила p < 0,001.Заключение. Из 21 штамма сем. Bacillaceae, продемонстрировавших в предыдущих исследованиях антагонизм в отношении фитопатогенных грибов Fusarium spp., Alternaria spp., Sclerotinia sclerotiorum, Geotrichum candidum, а также в отношении возбудителей плесневения семян р.р. Aspergillus, Penicillium и Mucor, лишь 1 штамм (RSA9, идентифицированный как представитель вида B. atrophaeus) показал высокую антибиотическую активность в отношении гриба R. stolonifer. Это проявилось в снижении площади колонии R. stolonifer в присутствии данного штамма на 92 % относительно контрольного варианта. Еще 16 штаммов показали слабую либо умеренную антибиотическую активность (снижение площади колоний гриба на 29,1–79,1 %), 4 штамма не показали антибиотической активности в отношении R. stolonifer. Не выявлено корреляции между антибиотической активностью изучаемых штаммов в отношении R. stolonifer и таксономически близкого представителя р. Mucor. Полученные результаты говорят о том, что для поиска бактерий-антагонистов, активных в отношении R. stolonifer, необходимо дополнительное тестирование штаммов даже в том случае, если они проявили антибиотическую активность в отношении близкородственных зигомицетов. В качестве практической рекомендации штамм B. atrophaeus RSA9 можно предложить в качестве агента для биологического метода борьбы с R. stolonifer.