сотрудник с 01.01.2021 по 01.01.2025
Щелково, г. Москва и Московская область, Россия
сотрудник
г. Москва и Московская область, Россия
сотрудник с 01.01.2018 по 01.01.2025
Россия
сотрудник с 01.01.2006 по 01.01.2025
г. Москва и Московская область, Россия
сотрудник с 01.01.1979 по 01.01.2025
г. Москва и Московская область, Россия
ВАК 4.1.1 Общее земледелие и растениеводство
ВАК 4.1.2 Селекция, семеноводство и биотехнология растений
ВАК 4.1.3 Агрохимия, агропочвоведение
ВАК 4.1.4 Садоводство, овощеводство, виноградарство и лекарственные культуры
ВАК 4.1.5 Мелиорация, водное хозяйство и агрофизика
ВАК 4.2.1 Патология животных, морфология, физиология, фармакология и токсикология
ВАК 4.2.2 Санитария, гигиена, экология, ветеринарно-санитарная экспертиза и биобезопасность
ВАК 4.2.3 Инфекционные болезни и иммунология животных
ВАК 4.2.4 Частная зоотехния, кормление, технологии приготовления кормов и производства продукции животноводства
ВАК 4.3.3 Пищевые системы
ВАК 4.3.5 Биотехнология продуктов питания и биологически активных веществ
УДК 636.018 Биологические основы разведения и выращивания животных
Цель исследований провести сравнительное изучение заморожено-оттаянного семени племенных быков молочного и комбинированного направлений продуктивности. Задачи: оценить качественные показатели криоконсервированного семени быков в трех временных точках: сразу после оттаивания, через 1 и 3 ч после оттаивания; изучить уровень фрагментации ДНК сперматозоидов у быков молочных и комбинированных пород. Объект исследований – сперма быков-производителей племенных предприятий Российской Федерации. Для изучения были отобраны образцы криоконсервированного семени (n = 87) быков молочных пород (голштинской и ярославской), а также комбинированных пород (симментальской и костромской). Исследовали подвижность сперматозоидов, сохранность структуры ДНК сразу после оттаивания, через 1 и 3 ч после оттаивания. Cразу после оттаивания содержание сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением составило (48,27 ± 1,896) % для быков молочных пород и (46,04 ± 1,771) % для комбинированных пород. Через 3 ч количество прогрессивно-подвижных сперматозоидов уменьшилось до (16,05 ± 1,263) % для молочных пород и до (12,66 ± 2,829) % для комбинированных. Более высокая фрагментация ДНК обнаружена в сперме быков-производителей молочного направления продуктивности с показателями: момент хвоста (Tail Moment) – 0,291 ± 0,012 и длина кометы (Comet Length) – 27,786 ± 0,042, а быки комбинированных пород отличались меньшими значениями поврежденности ДНК (момент хвоста – 0,091 ± 0,024, длина кометы – 25,663 ± 0,088). В изученной нами выборке быки комбинированного направления уступали быкам молочного направления продуктивности по выживаемости сперматозоидов. Быки молочного направления продуктивности отличались более высокими значениями большинства параметров, характеризующих поврежденность ДНК, в сравнении с быками комбинированных пород. Эти межпородные различия следует учитывать при селекционно-племенной работе и разработке технологий криоконсервации спермы.
быки-производители, качество спермы быков, сперматозоиды, ДНК-фрагментация, вспомогательные репродуктивные технологии
Введение. Успехи, достигнутые в последнее время в развитии передовых репродуктивных биотехнологий, таких как криосохранение гамет и эмбрионов, разделение семени по полу, синхронизация эстральных циклов самок сельскохозяйственных животных, трансплантация эмбрионов, в том числе эмбрионов с определенным полом, позволяют значительно ускорить генетический прогресс в стадах [1]. В контексте применения к сельскохозяйственным животным вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ) охватывают широкий спектр методов и процедур, направленных на управление половыми циклами, манипуляции с гаметами и эмбрионами. Цель применения ВРТ – сохранение, оптимальное использование и улучшение генетического потенциала животных.
Внедрение таких технологий ускоряет генетический прогресс, снижает риск передачи заболеваний и увеличивает количество животных за счет искусственного оплодотворения, множественной овуляции и трансплантации эмбрионов. Трансплантация эмбрионов позволяет производителям улучшить качество своего стада с использованием высокопродуктивных коров в качестве доноров и менее продуктивных животных в качестве реципиентов, еще больший эффект может быть достигнут при трансплантации эмбрионов с определенным полом, полученных при оплодотворении сексированной спермой [2].
Селекционные программы в последнее время были направлены на поиск характеристик, необходимых для увеличения надоев, повышения количества жира и белка в молоке. При этом репродуктивным характеристикам животных уделяли слишком мало внимания. Повышение показателей воспроизводства является ключевым фактором для эффективного роста поголовья крупного рогатого скота [1].
Как свидетельствуют данные научных исследований, существуют достоверные различия по качественным характеристикам спермы (объем эякулята, концентрация, подвижность сперматозоидов), ее оплодотворяющей способности, количеству мертворожденных и абортов в зависимости от возраста, генотипа, породной принадлежности и происхождения быков-производителей [3–6]. Влияние возраста на качество спермы наиболее изучено. B.Р. Pardede et al. (2020), Б.С. Иолчиев и др. (2024) считают, что возраст производителя влияет на качественные показатели спермы [3, 4].
В исследовании Е.Н. Нарышкиной (2021) многофакторный дисперсионный анализ показал, что оплодотворяющая способность семени быков-производителей на 27,5 % общей дисперсии обусловлена влиянием генетических факторов, а на 15,6 и 12,3 % – влиянием таких паратипических факторов, как «хозяйство» и «техник искусственного осеменения» [5]. Л.В. Холодова (2022) изучала межпородные различия в оплодотворяющей способности спермы быков голштинской и черно-пестрой породы в хозяйствах Республики Марий-Эл. Установлено, что оплодотворяющая способность семени производителей голштинской породы была выше и в среднем составила 79,9 %, а у быков черно-пестрой породы – 64,5 % [6]. При этом Л.В. Холодова отмечает, что оплодотворяющая способность изученных быков характеризовалась значительной индивидуальной изменчивостью и колебалась от 50,8 до 98 % [6]. При этом все авторы отмечают, что оплодотворяющая способность быков характеризуется значительной индивидуальной изменчивостью.
Эффективность использования в программах вспомогательных репродуктивных технологий ценных в племенном отношении быков-производителей зависит от биологической полноценности их семени, а это подразумевает не только подвижность, концентрацию сперматозоидов, но и сохранность различных структурных единиц сперматозоидов, целостность ядерной ДНК после процедур замораживания-оттаивания [4]. В настоящее время для анализа состояния ДНК в половых клетках самцов используют различные тесты, такие как Comet, TUNEL, SCSA и др. [7, 8].
Исследованиями установлено, что сперматозоиды с высокой степенью фрагментации ДНК сохраняют способность двигаться и оплодотворять яйцеклетку, но при этом могут отмечаться нарушения эмбриогенеза и ранняя эмбриональная смертность [9, 10]. Согласно последним научным данным, существует тесная связь между поврежденностью ДНК сперматозоидов и субфертильностью и бесплодием мужских особей [10].
Целостность ДНК в сперматозоидах необходима для успешного оплодотворения и нормального развития эмбриона. Влияние фрагментированной ДНК на фертильность отмечают многие авторы, и за последние десятилетия обсуждались различные подходы к определению возникновения этих нарушений [7, 11, 12]. По мнению D.P. Evenson (2022), при уровне DFI 25 % и более вероятность естественного зачатия снижается из-за ухудшения оплодотворяющей способности спермы [7].
В случае, если сперматозоид с поврежденной ДНК оплодотворяет яйцеклетку, возможна как репарация ДНК [12], так и включение ее в геном, если повреждение подавляет механизмы восстановления, что при последующем развитии эмбриона приведет к накоплению отрицательных мутаций и заболеваний [12, 13].
Имеются исследования, подтверждающие влияние возраста производителя на качество спермы и целостность ДНК. В работе B.Р. Pardede et al. (2020), проведенной на местной породе быков, показано, что с увеличением возраста достоверно повышается фрагментация ДНК сперматозоидов (р < 0,01), снижается число сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением (р < 0,01) [3]. В исследовании, проведенном Б.С. Иолчиевым с соавторами на быках в возрасте от 14 до 101 месяца, установлено, что возраст быков оказывал статистически значимое влияние на характер подвижности сперматозоидов и сохранность их ядерной ДНК, при этом максимальная поврежденность ДНК отмечена у быка в возрасте 14 мес., минимальная – у быка в возрасте 49 мес. [4]. Данные о влиянии возраста производителя на уровень фрагментации ядерной ДНК сперматозоидов противоречивы, требуются дальнейшие исследования в этой области.
Необходимо отметить, что в современной научной литературе практически отсутствуют работы о влиянии породы и направления продуктивности быков-производителей на уровень поврежденности ДНК сперматозоидов. В исследовании J. Morrell et al. (2018) приводится сравнительный анализ характеристик семени быков молочных и мясных пород. Установлено, что целостность мембран и число сперматозоидов с нормальной морфологией были выше, а индекс фрагментации ДНК ниже у быков молочных пород [14].
Для улучшения репродуктивных показателей в животноводстве необходимо внедрять современные технологии для оценки качества спермопродукции племенных быков. Более глубокое понимание (на молекулярном уровне) факторов, влияющих на оплодотворение яйцеклетки и развитие эмбрионов у крупного рогатого скота, позволит выявить биомаркеры для отбора быков, обладающих высокой фертильностью.
Цель исследования – изучить подвижность сперматозоидов и целостность ДНК в криоконсервированной сперме быков-производителей в зависимости от направления продуктивности.
Задачи: оценить качественные показатели криоконсервированного семени быков молочного и комбинированного направлений продуктивности сразу после оттаивания, через 1 и 3 ч после оттаивания; изучить уровень фрагментации ДНК сперматозоидов у быков молочных и комбинированных пород.
Объекты и методы. Исследование проведено сотрудниками лаборатории биологии воспроизведения сельскохозяйственных животных ФГБНУ ВНИИплем. Исследование фрагментации ДНК проведено в сотрудничестве с ФГБУ «Государственный научный центр РФ – Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна» ФМБА России.
Объектом исследований являлась сперма быков-производителей племенных предприятий Российской Федерации.
Для исследования показателей биологической полноценности семени использовали криоконсервированную традиционную сперму быков (n=87) молочных пород (голштинской и ярославской) и комбинированных пород (симментальской и костромской), произведенную отечественными племпредприятиями, входящими в холдинг «ГЦВ». Образцы доставляли в лабораторию в сосуде Дьюара СДС-6-2, заполненном жидким азотом.
Оттаивание криоконсервированного семени проводили в водяной бане при температуре 38 °С в течение 10 секунд согласно протоколу производителя семени. Для анализа подвижности сперматозоидов использовали аналитическую систему CASA Аргус (ООО АргусСофт, Россия) и микроскоп CarlZeissAxiostarplus (CarlZeiss, Германия) с подогреваемым столиком. Оценивали количество сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением (ППД), число мертвых (неподвижных) и сперматозоидов с иными видами подвижности. Сохраняли сперму для оценки переживаемости в термошкафу Memmert INB-200 при температуре 37 °С.
Величину поврежденности ДНК определяли методом электрофореза ДНК иммобилизированных в агарозу единичных клеток – ДНК-комет (щелочная версия) [15]. Для проведения анализа сперму смешивали с теплым фосфатным буфером для получения требуемой концентрации. Затем полученную суспензию смешивали с предварительно расплавленной и охлажденной легкоплавкой агарозой (тип IV), тщательно перемешивали и наносили смесь на предметные стекла, предварительно покрытые слоем 1 % нормоплавкой агарозы. Лизис клеток проводили в специально разработанном лизирующем буфере (300 mМNaOH; 1mM EDTA; 1 % SDS) в течение 20 мин при 37 °С. После лизиса клеток слайды переносили в щелочной раствор (300 mMNaOH; 1 mM EDTA; pH> 13) в камеру для электрофореза на 10 мин. После проведения электрофореза анализировали полученные слайды с помощью флуоресцентного микроскопа Nikon Eclipse Ni-U (Nikon, Япония) с использованием системы визуализации микрофотоизображений «ProgRessHFcool/CaputerPro 2.8.8» (Jenoptic AG, Германия) и программного обеспечения CASP LAB 1.2.2. В качестве критерия целостности ДНК в сперматозоидах (исследовали не менее 100 половых клеток на каждом слайде) оценивали такие показатели, как процент ДНК в хвосте кометы, длина миграции ДНК в хвосте кометы, момент хвоста кометы и момент хвоста по Оливе.
Результаты и их обсуждение. Нами изучены качественные показатели спермы быков в зависимости от направления продуктивности. Быки были разделены на две группы по направлению продуктивности: молочные (голштинская и ярославская породы, n = 58) и комбинированные (симментальская и костромская породы, n = 29). Оценивали содержание сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением (ППД), с иными видами подвижности и неподвижных (мертвых) после оттаивания в трех временных точках: сразу после оттаивания (0 ч), через 1 и 3 ч. Данные представлены в таблице 1.
Таблица 1
Характеристики замороженно-оттаянной спермы быков-производителей
разных направлений продуктивности, %
Characteristics of frozen-thawed semen from breeding bulls of different production types, %
|
Подвижность сперматозоидов |
Быки молочного направления |
Быки комбинированного направления |
|
Сразу после оттаивания |
||
|
ППД |
48,27±1,896 |
|
|
Иные виды подвижности |
2,88±0,272 |
2,17±0,206 |
|
Мертвые |
46,92±1,886 |
51,79±1,819 |
|
Через 1 ч после оттаивания |
||
|
ППД |
33,51±1,821 |
25,31±3,336 |
|
Иные виды подвижности |
3,03±0,441 |
1,95±3,336 |
|
Мертвые |
63,42±1,814 |
73,91±3,466 |
|
Через 3 ч после оттаивания |
||
|
ППД |
16,05±1,263 |
12,66±2,829 |
|
Иные виды подвижности |
3,57±0,689 |
1,36±0,125 |
|
Мертвые |
80,37±1,362 |
86,71±2,884 |
Установлено, что сразу после оттаивания содержание сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением составило (48,27 ± 1,896) % для молочных пород и (46,04 ± 1,771) % для комбинированных. Через 1 ч показатели снизились до (33,51 ± 1,821) % у молочных пород и (25,31 ± 3,336) % у комбинированных. Через 3 ч количество прогрессивно-подвижных сперматозоидов уменьшается до (16,05 ± 1,263) % для молочных пород и до (12,66 ± 2,829) % для комбинированных. Из данных таблицы 1 видно, что в исследованной нами выборке быки комбинированного направления уступали быкам молочного направления продуктивности по выживаемости сперматозоидов. Статистически значимых различий между группами быков не выявлено. Анализ параметров, характеризующих тип движения сперматозоидов, показал, что в пределах каждой группы отмечается достаточно высокая внутригрупповая вариабельность, особенно через 1 и 3 ч после оттаивания. Для быков молочного направления стандартная ошибка среднего (SEM) по показателю ППД через 1 ч составила 1,821, тогда как у комбинированных пород она была почти вдвое выше (3,336), что указывает на менее устойчивое качество спермы в данной группе. Подобная динамика наблюдается и в отношении доли мертвых сперматозоидов: у комбинированных пород через 3 ч их количество достигало (86,71 ± 2,884) %, что почти на 6 % выше, чем у молочных ((80,37 ± 1,362) %). Несмотря на отсутствие статистической достоверности различий (p > 0,05), биологическая значимость этих результатов очевидна, так как снижение жизнеспособности сперматозоидов даже на 5–10 % может существенно отразиться на эффективности оплодотворения при искусственном осеменении.
Имеется разница по плотности и динамике распределения значений. Наглядно эти данные представлены на рисунках 1, 2. На рисунке 1 представлено распределение сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением сразу после оттаивания, где видно, что у молочных пород распределение более равномерное, а у комбинированных пород отмечается тенденция к большей вариабельности.
Рис. 1. Распределение сперматозоидов с ППД после оттаивания
в зависимости от направления продуктивности
Post-thaw distribution of spermatozoa with progressive motility depending on production type
На рисунке 2, демонстрирующем распределение через 1 ч после оттаивания, различия между группами становятся более выраженными, у комбинированных пород усиливается разрыв между квартилями.
Рис. 2. Распределение сперматозоидов с ППД через час после оттаивания
в зависимости от направления продуктивности
Distribution of spermatozoa with progressive motility one-hourpost-thaw, depending on production type
Анализ целостности ДНК сперматозоидов (табл. 2) показал, что площадь головы (HeadArea) имеет наибольшее значение в группе быков (скота/быков) молочного направления (424,267 ± 0,891), тогда как в группе животных комбинированного направления продуктивности показатели ниже (375,630 ± 1,863). Площадь хвоста (TailArea) также наиболее велика в группе быков молочных пород (48,455 ± 1,062), с меньшими значениями у быков комбинированных пород (20,716 ± 2,222).
Более высокое значение содержания ДНК в хвосте (TailDNA) наблюдалось у быков молочных пород (2,914 ± 0,056), у быков комбинированного направления продуктивности этот показатель составил 1,685 ± 0,116.
Таблица 2
Показатели, характеризующие состояние ДНК в замороженно-оттаянных сперматозоидах быков-производителей, в зависимости от направления продуктивности
DNA integrity parameters in frozen-thawed spermatozoa of breeding bulls, depending
on production type
|
Зависимая переменная |
Группа быков по направлению продуктивности |
Среднее, усл. ед. |
|
HeadArea |
Комбинированная |
375,630±1,863 |
|
Молочная |
424,267а±0,891 |
|
|
TailArea |
Комбинированная |
20,716±2,222 |
|
Молочная |
48,455а±1,062 |
|
|
HeadDNA |
Комбинированная |
141,951±0,659 |
|
Молочная |
153,493а±0,315 |
|
|
TailDNA |
Комбинированная |
1,685±0,116 |
|
Молочная |
2,914а±0,056 |
|
|
HeadDNA % |
Комбинированная |
98,680±0,066 |
|
Молочная |
98,181±0,032 |
|
|
TailDNA % |
Комбинированная |
1,320±0,066 |
|
Молочная |
1,819а±0,032 |
|
|
HeadRadius |
Комбинированная |
10,707±0,025 |
|
Молочная |
11,314а±0,012 |
|
|
TailLength |
Комбинированная |
3,248±0,061 |
|
Молочная |
4,159а±0,029 |
|
|
CometLength |
Комбинированная |
25,663±0,088 |
|
Молочная |
27,786а±0,042 |
|
|
HeadMeanX |
Комбинированная |
28,362±0,178 |
|
Молочная |
30,785а±0,085 |
|
|
TailMeanX |
Комбинированная |
40,683±0,180 |
|
Молочная |
43,743а,±0,086 |
|
|
TailMoment |
Комбинированная |
0,091±0,024 |
|
Молочная |
0,291а±0,012 |
|
|
OliveTailMoment |
Комбинированная |
0,148±0,016 |
|
Молочная |
0,289а±0,007 |
Примечания: а, b – обозначения между группами для указания достоверности разницы; а – комбинированная; b – молочная; P ≤ 0,05.
Процентное содержание ДНК в голове кометы (HeadDNA %) оказалось максимальным у быков комбинированных пород (98,680 ± 0,066). Наибольшее процентное содержания ДНК в хвосте (TailDNA %) показали молочные породы – 1,819 ± 0,032, а комбинированные имели более низкие показатели – 1,320 ± 0,066.
Радиус головы (HeadRadius) был больше в группе быков молочного направления (11,314 ± 0,012), в группе быков комбинированного направления продуктивности HeadRadius составил 10,707 ± 0,025.
Длина хвоста (TailLength) и длина кометы (CometLength) были выше у быков молочного направления продуктивности (4,159 ± 0,029 и 27,786 ± 0,042 соответственно), тогда как быки комбинированного направления продемонстрировали наименьшие показатели. Координаты центров плотности распределения ДНК в голове (HeadMeanX) и в хвосте (TailMeanX) наибольшие значения имели у быков молочного направления продуктивности (30,785 ± 0,085 и 43,743 ± 0,086 соответственно), а наименьшие – у быков комбинированного направления. Наконец, момент хвоста (TailMoment) и момент хвоста по Оливе (OliveTailMoment) подтверждают это распределение, где быки молочных пород имели наибольшие значения (0,291 ± 0,012 и 0,289 ± 0,007 соответственно), а комбинированных пород – наименьшие (0,091 ± 0,024 и 0,148 ± 0,016).
Сравнительный анализ параметров целостности ДНК показал, что по большинству параметров сперматозоиды быков молочных пород демонстрировали более высокие значения, что может свидетельствовать о лучшей организации и компактизации хроматина. Например, показатели площади головы (HeadArea) и радиуса головы (HeadRadius) статистически значимо выше у быков молочных пород (p ≤ 0,05), что отражает более плотную упаковку ДНК. При этом стоит отметить, что у молочных пород одновременно выявлена и большая степень повреждений ДНК (TailMoment и CometLength), что указывает на двойственный характер адаптационных механизмов: с одной стороны – высокая степень конденсации хроматина, с другой – повышенная чувствительность к повреждающему воздействию криоконсервирования. Интересным является то, что процентное содержание ДНК в голове (HeadDNA %) оказалось несколько выше у комбинированных пород: 98,680 ± 0,066 против 98,181 ± 0,032 у молочных. Это, в совокупности с меньшими значениями повреждений (TailMoment, OliveTailMoment), свидетельствует о более стабильной структуре хроматина. Однако практическая сторона вопроса заключается в том, что даже при более целостной ДНК у комбинированных пород резко снижается общее количество подвижных сперматозоидов после замораживания.
Таким образом, быки молочного направления продуктивности характеризуются более высокими значениями большинства параметров в сравнении с быками комбинированных пород. Эти данные демонстрируют влияние направления продуктивности на уровни компактизации ДНК в хроматине сперматозоидов быков-производителей.
Заключение. Наши исследования продемонстрировали влияние направления продуктивности быков-производителей на активность и выживаемость сперматозоидов после замораживания-оттаивания и на уровень поврежденности ДНК. Установлено, что в изученной нами выборке быки комбинированного направления уступали быкам молочного направления продуктивности по выживаемости сперматозоидов. Сразу после оттаивания содержание сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением составило в среднем (48,27 ± 1,896) % для молочных пород и (46,04 ± 1,771) % для комбинированных. Через 1 ч после оттаивания различия в показателях заметно возросли: (33,51 ± 1,821) % сперматозоидов с ППД у молочных пород и (25,31 ± 3,336) % у комбинированных. Через 3 ч количество прогрессивно-подвижных сперматозоидов уменьшилось до (16,05 ± 1,263) и (12,66 ± 2,829) % соответственно для быков молочных и комбинированных пород. Статистически значимых различий между группами быков в подвижности половых клеток не выявлено, однако наблюдалась существенная разница по плотности и динамике распределения значений содержания сперматозоидов с ППД сразу после оттаивания и через час после оттаивания. У производителей молочных пород распределение было более равномерным, а у комбинированных пород отмечалась тенденция к большей вариабельности значений. Наибольшая степень фрагментации ДНК обнаружена в сперме быков-производителей молочного направления продуктивности с показателями: момент хвоста (TailMoment) – 0,291 ± 0,012 и длина кометы (CometLength) – 27,786 ± 0,042, а быки комбинированных пород отличались меньшими значениями поврежденности ДНК (момент хвоста – 0,091 ± 0,024, длина кометы – 25,663 ± 0,088). Таким образом, более высокая поврежденность ДНК сперматозоидов отмечалась у быков молочного направления продуктивности. Эти различия следует учитывать при селекционно-племенной работе и разработке технологий криоконсервации спермы. Практическая значимость полученных нами результатов заключается в том, что для быков молочного направления может потребоваться оптимизация криозащитных сред-разбавителей для снижения повреждаемости ДНК, а для быков комбинированного направления – улучшение методик, повышающих выживаемость сперматозоидов.
1. Roche J.R., Burke C.R., Crookenden M.A., et al. Fertility and the transition dairy cow // Reproduction, Fertility and Development. 2018. N 30. Р. 85–100. DOI:https://doi.org/10.1071/RD17412.
2. Hasler J.F. Forty years of embryo transfer in cattle: a review focusing on the journal Theriogenology, the growth of the industry in North America, and personal reminisces // Theriogenology. 2014. Vol. 81, N 1. Р. 152–169. DOI:https://doi.org/10.1016/j.theriogenology2013.09.010.
3. Pardede B.Р., Supriatna I., Yudi Y., et al. Decreased bull fertility: age-related changes in sperm motility and DNA fragmentation. In: Е3S Web Conf. The 1st International Conference on Veterinary, Animal, and Environmental Sciences (ICVAES 2019). 2020. Vol. 151. DOI:https://doi.org/10.1051/e3sconf/202015101010.
4. Иолчиев Б.С., Шмидт А.В., Луконина О.Н., и др. Дисперсия хроматина сперматозоидов быков-производителей в зависимости от возраста // Животноводство и кормопроизводство. 2024. Т. 107, № 4. С. 255–265. DOI:https://doi.org/10.33284/2658-3135-107-4-255.
5. Нарышкина Е.Н. Вариабельность показателя оплодотворяющей способности семени быков-производителей голштинской породы в племенных и товарных стадах // Пермский аграрный вестник. 2021. № 4 (36). С. 124–133. DOI:https://doi.org/10.47737/2307-2873_2021_36_124. EDN: https://elibrary.ru/DNXBTP.
6. Холодова Л.В. Анализ оплодотворяющей способности семени быков-производителей разных генотипов. В сб.: Национальная научно-практическая конференция с международным участием «Актуальные проблемы интенсификации развития животноводства». Брянск: Брянский ГАУ, 2022. С. 23–32. EDN: https://elibrary.ru/GDUYUE.
7. Evenson D.P. Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA®) for Fertility Assessment // Current protocolsю 2022. Vol. 2, N 8. P. e508. DOI:https://doi.org/10.1002/cpz1.508.
8. Sharma R., Iovine C., Agarwal A., et al. TUNEL assay – Standardized method for testing sperm DNA fragmentation // Andrologia. 2020. Vol. 53. Р. 53. DOI:https://doi.org/10.1111/and.13738.
9. Esteves S.C., Zini A., Coward R.M., et al. Sperm DNA fragmentation testing: Summary evidence and clinical practice recommendations // Andrologia. 2021. Vol. 53, N 2. P. e13874. DOI:https://doi.org/10.1111/and.13874.
10. Amor Н., Zeyad A., Alkhaled Y., et al. Relationship between nuclear DNA fragmentation, mitochondrial DNA damage and standard sperm parameters in spermatozoa of fertile and sub-fertile men before and after freeze-thawing procedure // Andrologia. 2018. Vol. 50, N 5. P. e12998. DOI:https://doi.org/10.1111/and.12998.
11. Mohammadi Z., Tavalaee M., Gharagozloo P., et al. Could high DNA stainability (HDS) be a valuable indicator of sperm nuclear integrity? // Basic Clin. Androl. 2020. Vol. 30. Р. 12. DOI:https://doi.org/10.1186/s12610-020-00110-8.
12. Horta F., Catt S., Ramachandran P., et al. Female ageing affects the DNA repair capacity of oocytes in IVF using a controlled model of sperm DNA damage in mice // Hum Reprod 2020. № 35. Р. 529–544. DOI:https://doi.org/10.1093/humrep/dez308.
13. Wang B., Li Zh., Wang Ch., et al. Zygotic G2/M cell cycle arrest induced by ATM/Chk1 activation and DNA repair in mouse embryos fertilized with hydrogen peroxide-treated epididymal mouse sperm // PLoS One. 2013. Vol. 8. P. e73987. DOI:https://doi.org/10.1371/journal.pone.0073987.
14. Morrell J.M., Valeanu A.S., Lundeheim N., et al. Sperm quality in frozen beef and dairy bull semen // Acta Vet Scand. 2018. Vol. 60. P. 41. DOI:https://doi.org/10.1186/s13028-018-0396-2.
15. Сollins A., Møller P., Gajski G., et al. Measuring DNA modifications with the comet assay: a compendium of protocols // Nature Protocols. 2023. Vol. 18, N 3. DOI:https://doi.org/10.1038/s41596-022-00754-y.
