Введение. Птицеводство от других отраслей животноводства выгодно отличают высокие показатели воспроизводства, энергии роста, оплаты корма продукции. Птицеводство – одна из самых интенсивных отраслей аграрного комплекса, поставляющая населению ценные продукты питания – яйца и мясо птицы. Но известно, что при интенсивных системах содержания в условиях промышленного производства организм птицы функционирует с максимальной нагрузкой, на пределе своих физиологических возможностей [1–7].
По мнению многих ученых, пробиотики способствуют восстановлению пищеварения, биологического статуса, иммунного ответа у птицы, повышают эффективность вакцинаций [8–11].
Одним из самых крупных органов лимфоидной системы, выполняющего функции лимфопоэза, накопления тромбоцитов, а также иммунную функцию, является селезенка [12–14]. На ее функционирование оказывают влияние различные факторы. Поэтому изучение влияния иммуностимуляторов на анатомо-гистологические особенности органов является актуальным.
Цель исследования – изучение морфофункциональных параметров селезенки при воздействии иммуностимулирующих веществ на основе бактерий.
Объекты и методы. Научно-исследовательская работа, проводимая с целью изучения топографии, морфологии, гистологии органов птицы при воздействии влияния иммуностимулирующих веществ, выполнена в условиях лаборатории кафедры «Анатомия и физиология» ГАУ Северного Зауралья. Бройлеры кросса Кобб 500 являлись объектом исследования. Данный кросс – мясного направления, с генетическим потенциалом среднесуточного прироста около 58 г. Для выращивания цыплят характерны низкие затраты корма на единицу прироста.
В ходе выполнения исследования были сформированы три половозрастные группы птиц. Срок выращивания составил 34 дня. Группа петушков и группа курочек выращивались отдельно, в клетках КБУ. На протяжении всего периода наблюдений кормление опытных птиц соответствовало зоогигиеническим нормам. Контрольная группа цыплят потребляла основной рацион, состоящий из полноценного комбикорма и чистой воды. Цыплята первой опытной группы в основном периоде опыта получали пробиотическую добавку «Ветом 2» с питьевой водой в дозе 50 мг на 1 кг живой массы, а цыплята второй опытной группы – «Лактобифадол» с кормом в дозе 0,2 г на 1 кг живой массы птицы.
На 34-й день выращивания из эксперимента птицу выводили посредствам эвтаназии. Эвтаназию осуществляли в соответствии с Директивой 2010/63 ЕИ Европейского парламента и Совета Европейского союза от 22.09.2010 г. по охране животных, используемых в научных целях. Анатомическое вскрытие тел птиц проводили согласно методике А.В. Комарова [15].
У цыплят контрольной и опытных групп в возрасте 34 дней изучали клинический статус с применением общепринятых в клинической практике методик. Обследованию подвергали по 3 особи из каждой группы. Путем индивидуального взвешивания определяли массу тела (Мт, г). Абсолютную массу (Ма, г) отпрепарированных органов измеряли на весах ВЛКТ-500 (ГОСТ 241-04-08) с точностью до 0,01 г. Относительную массу селезенки рассчитывали по общепринятой методике с учетом массы тела птицы.
От каждой группы птиц отбирали материал для анатомо-морфологического и гистологического исследований [16]. Морфологические исследования описательного характера дополняли морфометрией. Изучали линейные размеры органов, таких как печень, селезенка, почки, бурса, тонкий и толстый отделы кишечника. Замеры линейных параметров делали с помощью штангенциркуля Electronic Digital Caliper с точностью ±0,2 мм. При гистологических исследованиях проводили подсчет структурных элементов и определение размера морфоструктур. Микроскопические исследования осуществляли микроскопом Micros при увеличении в 200–400 раз в 10 полях зрения правильно ориентированных срезов. Изучению подвергали не менее 100 клеток.
Установленные числовые данные подвергали вариативной статистической обработке по Стьюденту с использованием MS Excel 2010.
Результаты и их обсуждение. Особая роль в обеспечении иммунного гомеостаза, адаптации организма и повышении его резистентности под влиянием различных экстремальных факторов принадлежит лимфоидной ткани. Воздействие на организм внешних и внутренних факторов приводит к выраженной ее перестройке, направленной на образование различных популяций лимфоцитов, обеспечивающих оптимальную функцию иммунологического надзора. В селезенке содержатся зрелые лимфоциты, которые способны обезвреживать чужеродных агентов, нарушающих гомеостаз организма.
Селезенка – паренхиматозный, иммунный, кроветворный орган, расположенный в грудобрюшной полости на правой стороне желудка. Селезенка у всех опытных групп треугольной формы темно-красного цвета (рис. 1). Масса селезенки у всех групп птиц составила 2,0±0,11 г. Масса тела бройлеров контрольной группы составила 2064,1±31,53 г; первой опытной группы – 2106,4±24,35 г; второй опытной группы – 2163,3±16,21 г.
Относительная масса селезенки к массе тела птицы в среднем в группах составила: контрольной – 0,097 %; первой опытной – 0,095; второй опытной – 0,092 %.
Длина селезенки бройлеров контрольной группы и первой опытной составила 2,3±0,3 см. Длина селезенки цыплят второй опытной группы на 0,76 см больше в сравнении с данными контрольной группы. Ширина органа птиц контрольной, первой и второй групп составила 1,6±0,1; 1,5±0,1 и 1,8±0,1 см соответственно. Таким образом, наибольшие размеры имела селезенка цыплят, содержащихся во второй опытной группе.
|
|
|
|
|
А |
Б |
В |
Рис. 1. Селезенка: А – контрольной группы; Б – первой опытной группы;
В – второй опытной группы
Гистологические исследования селезенки цыплят 34-дневного возраста всех групп указывают на то, что процесс дифференцировки лимфоидной ткани на Т- и В-зависимые зоны не закончен. Капсула селезенки представлена плотной неоформленной соединительной тканью, в которой видны эластические, коллагеновые волокна и пучки гладких миоцитов. От капсулы внутрь селезенки отходят трабекулы, имеющие гладкие миоциты, расположенные между эластическими и коллагеновыми волокнами, а также кровеносные сосуды. Совокупность сообщающихся трабекул формирует губчатый остов селезенки.
Паренхима органа птиц контрольной группы представлена лимфоцитарными клетками, которые располагаются диффузно (рис. 2, А). Паренхима разделена на белую и красную пульпу, при этом отмечается большой объем белой пульпы. Фолликулы нечетко выражены, 1–2 в поле зрения, при этом часть фолликулов вытянутой овальной формы. Они имеют периартериальные лимфоидные муфты (Т-зависимая зона) и слабо выраженную В-зависимую зону (рис. 2, Б).
|
|
|
|
А |
Б |
Рис. 2. Гистологическая картина селезенки контрольной группы.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 200
Паренхима органа цыплят первой опытной группы представлена лимфацитарными клетками, которые располагаются диффузно (рис. 3, А). Паренхима не полностью разделена на белую и красную пульпу. Но наблюдается начало процесса дифференциации белой пульпы в виде образования нечетко выраженных округлых фолликулов, имеющих периартериальные лимфоидные муфты (Т-зависимая зона) и слабо выраженную В-зависимую зону (рис. 3, Б).
|
|
|
|
А |
Б |
Рис. 3. Гистологическая картина селезенки первой опытной группы.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 200
Паренхима селезенки бройлеров второй опытной группы представлена лимфацитарными клетками, которые располагаются диффузно (рис. 4, А). Паренхима не полностью разделена на белую и красную пульпу. Фолликулы нечетко выраженные, имеют овальную форму, а также периартериальные лимфоидные муфты (Т-зависимая зона) и слабо выраженную В-зависимую зону (рис. 4, Б). В поле зрения встречаются чаще 1 фолликул, реже 2–3 фолликула. Стенки кровеносных сосудов утолщены и кровенаполнены.
|
|
|
|
А |
Б |
Рис. 4. Гистологическая картина селезенки второй опытной группы.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 200
Площадь лимфоидных фолликулов селезенки цыплят контрольной группы составляет 5952,56±90,89 мкм2, периметр 303,35±1,82 мкм. Площадь и периметр лимфоидных фолликулов селезенки бройлеров первой опытной группы имеют следующие значения – 8881,65±24,53 мкм2 и 340,85±4,04 мкм соответственно. У птиц второй опытной группы площадь лимфоидных фолликулов составляет 6775,71±22,6 мкм2, периметр – 300,31±5,03 мкм. Таким образом, объем лимфоидных фолликулов селезенки увеличился в первой опытной группе на 49,2 %, во второй группе – на 13,8 %.
При изучении периартериальных сосудов органа было выяснено, что их площадь у птиц контрольной группы – 85,73±6,64 мкм2; первой опытной группы – 75,37±4,44; второй опытной группы – 70,85±5,56 мкм2. Таким образом, периартериальные сосуды селезенки цыплят первой опытной группы уменьшены на 12 %, а второй опытной – на 15 %.
При оценке размера белой пульпы в селезенке цыплят установлено, что ее объем в структуре органа увеличен у птиц второй группы (она занимала 43,68 % от общей площади поля зрения) по сравнению с контрольной на 6,54 %. В первой опытной группе выявлено увеличение объема белой пульпы (38,73 %) лишь на 1,59 %.
Заключение. В результате проведенных исследований установлено, что топография селезенки у цыплят бройлеров всех групп соответствует анатомической норме. Относительная масса селезенки к массе тела в среднем составила в контрольной группе 0,097 %; в первой опытной группе – 0,095; во второй опытной – 0,092 %. Из линейных показателей наибольшую разницу имеет длина и ширина селезенки цыплят второй опытной группы. У цыплят 34-дневного возраста гистологический процесс дифференцировки лимфоидной ткани на Т- и В-зависимые зоны не закончен. Небольшое увеличение объема белой пульпы органа цыплят первой опытной группы произошло, вероятно, за счет увеличения площади лимфоидных фолликулов. В паренхиме селезенки птиц второй опытной группы отмечается значительное увеличение белой пульпы, при этом объем лимфоидных фолликулов всего на 13,8 % больше, чем в селезенке птиц контрольной группы. Все эти процессы указывают на то, что пробиотические добавки «Ветом 2» и «Лактобифадол» стимулируют развитие лимфоидной ткани селезенки.
