Russian Federation
Differential diagnosis of tularemia from brucellosis in a sick stallion kept in one of private stables in Omsk Region was given in the study. There were cases of mass death of wild rodents (small mouse-like rodents, wild hamsters, ground squirrels) and, subsequently, cats in the territory of the private stable during two months (July, August). The main clinical symptoms of the sick stallion were: cachexia in the combination with normal appetite, arthritis of the put joints of the pelvic limbs and subfebrile body temperature. Labora- tory serological diagnosis included a complex of reactions such as Wright Agglutination Test, Complement Fixation Test (CFT), Rose Bengal Antigen Test, Indirect Hemagglutination Test (IHT). Antibody titers for the tularemia causative agent in IHT were 1: 320, which was a diagnostically important indicator. A highly sensitive Polymerase Chain Reaction (PCR) method was also used, which made it possible to carry out differential diagnostics, exclude brucellosis. Additional serological studies (IHT) gave negative reactions to yersiniosis (serovars 03 and 09) and to brucellosis (CFT). At compelled slaughter pathological changes in separate bodies were revealed. The liver was enlarged, there were multiple small grayish-yellow foci on the surface, scraping in the section was copious. The spleen was greatly enlarged, there were small spotted hemorrhages on its surface, the consistency of the organ was pasty and the edges were rounded. In the section, the pulp was dark cherry in color, while scraping it was copious. Mesenteric lymph nodes were also enlarged, swollen, with areas of hemorrhage and necrosis. On the serous membrane of the small intestine and mesentery, point hemorrhages were observed. The described clinical case confirms the need for a thor- ough differential diagnosis of horse tularemia in order to exclude other infections (brucellosis, yersiniosis) using highly sensitive laboratory diagnostic methods.
horses, brucellosis, tularemia, hematology, serology, PCR, diagnostics.
Введение. Породистых лошадей всегда счита- ли национальным достоянием, которое старались приумножить. Чистокровная верховая порода ло- шадей является наиболее престижной и дорого- стоящей на территории Российской Федерации. Стоимость некоторых представителей породы может достигать десятков миллионов рублей. Со- ответственно, экономические убытки, возникаю- щие в результате падежа или вынужденного убоя племенных животных, могут нанести непоправи- мый ущерб племенным хозяйствам, особенно не- большим формам собственности.
В последние годы на территории трех фе- деральных округов Российской Федерации (Се- веро-Западного, Сибирского и Центрального) регистрируется активизация природных очагов ту- ляремии. Рост заболеваемости животных наблю- дается в годы повышения численности грызунов. Туляремия – природно-очаговая зооантропо- нозная инфекция, характеризующаяся поражени- ем диких грызунов и членистоногих, а также птиц и млекопитающих, в том числе лошадей и человека [1, 2]. Заболевание характеризуется лихорадкой, интоксикацией, лимфаденитами и хроническим течением [3–7]. В настоящее время возбудитель
заболевания Francisella tularensis относится к се- мейству Francisellaceae, роду Francisella. Возбуди- тель в своем составе содержит соматический (О) и оболочечный (Vi) антигены, он также обладает антигенным сродством с бруцеллами и возбуди- телем иерсиниоза, что необходимо учитывать при проведении лабораторной диагностики. Ос- новным фактором патогенности является эндо- токсин. Возбудитель туляремии высоко устойчив в условиях окружающей среды, особенно при низких температурах и высокой влажности, но подвержен высыханию [8].
Эпизоотологические данные. Основным источником и резервуаром возбудителя инфек- ции являются грызуны, которые переболевают туляремией в тяжелой септической форме, не- редко с летальным исходом. Выделение воз- будителя происходит с секретами и экскретами больных животных, а также огромное количе- ство Fr. tularensis содержат трупы. Для данной инфекции характерна природная очаговость [4, 9, 10]. Персистенция возбудителя в природных очагах поддерживается также кровососущими насекомыми. Известно несколько путей пере- дачи возбудителя, а именно трансмиссивный,
алиментарный, контактный и аспирационный [9]. По данным ряда авторов, возможно внутриу- тробное заражение. Чаще всего наблюдаются спорадические случаи или регистрируют отдель- ные локальные вспышки. Для лошадей особое значение имеет трансмиссивный путь передачи инфекции. Лошади также могут заражаться али- ментарным путем через инфицированные корма и воду [11].
Патогенез. Развитие инфекционного про- цесса происходит после внедрения возбудителя через поврежденные кожу и слизистые оболочки глаз, дыхательной и пищеварительной систем. В месте проникновения возбудитель начинает раз- множаться, вызывая воспалительный процесс с последующим нарушением слизистых оболо- чек. С током крови и лимфы микроорганизмы проникают в регионарные лимфатические узлы, оседают там и вызывают развитие специфиче- ского лимфаденита [12]. Разрушение микробов в лимфатических узлах и в крови приводит к высвобождению эндотоксина, клинически это проявляется интоксикацией и развитием местно- го воспалительного процесса.
Клиническое проявление туляремии у лоша- дей не однотипно: наблюдают острое течение болезни в виде абортов или атипичное, бессим- птомное. Кобылы абортируют на 4–5-м меся- це жеребости, после аборта у них не отмечено повышения температуры тела и осложнений. Развитие болезни обусловлено вирулентностью возбудителя, дозой заражения и местом его про- никновения в организм восприимчивого живот- ного [2].
Патолого-анатомические изменения у лоша- дей изучены недостаточно. В легких, селезенке, печени выявляют желтовато-серые узелки, ха- рактерные для септицемии [2].
Диагностика заболевания базируется на анализе клинических признаков, эпизоотоло- гических данных и результатов лабораторных исследований. В последнее время существен- ную роль приобретают серологические методы исследования, среди которых используются ре- акция агглютинации (РА) и реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), с обязательным уче- том титра антител. Так, диагностические титры антител от 1:10–1:320, а у сельскохозяйствен- ных животных они могут достигать 1:320–1:640, нередко бывают низкими. Это зависит от формы переболевания, вирулентности возбудителя и уровня иммунитета. Необходимо учитывать воз- можность перекрестных реакций с бруцеллами и возбудителями иерсиниоза. Чаще при серологи- ческой диагностике применяют обе реакции (РА и РНГА). Использование ПЦР позволяет обнару- жить специфическую ДНК возбудителя.
Лечение. Этиотропная терапия проводится антибиотиками аминогликозидами (стрептоми- цин или гентамицин) или тетрациклинами (док- сициклин, рифампицин) [2].
Профилактические мероприятия включают контроль за природными очагами туляремии, а именно обнаружение эпизоотий среди диких животных, проведение дератизационных и де- зинсекционных мероприятий. Биопрепараты для специфической профилактики туляремии у жи- вотных не разработаны [5].
Цель исследования. Изучить проявление туляремии у жеребца чистокровной верховой по- роды на территории Омской области.
Материал и методы исследования. Мате- риалом для исследования являлись пробы кро- ви, мочи, кала, смывы из прямой кишки, получен- ные от жеребца.
Клиническое обследование животного вклю- чало сбор прижизненного анамнеза, осмотр, определение температуры тела, цвета видимых слизистых оболочек.
Гематологические исследования проводили согласно общепринятым в ветеринарной прак- тике методам, при этом определяли количество эритроцитов, лейкоцитов, а также осуществляли подсчет лейкограммы и определение СОЭ [13]. Биохимические показатели крови определяли на цифровом биохимическом анализаторе Stat Fax 3300. Серологическое и ПЦР-исследования на бруцеллез, серологические исследования на ту- ляремию, иерсиниозы проводили на базе ФБУН
«Омский НИИ природно-очаговых инфекций» Роспотребнадзора. ПЦР-диагностику осущест- вляли с использованием набора реагентов для обнаружения ДНК возбудителя инфекционных заболеваний методом ПЦР (GenePaK® DNA PCR test). Патолого-анатомическое вскрытие проводили согласно общепринятым методикам.
Результаты исследования и их обсужде- ние
Анамнез жизни и болезни. Заболевание было зарегистрировано в одном из коневодче- ских хозяйств Омской области. Жеребец чисто- кровной верховой породы 1999 г. рождения на период болезни содержался в данном хозяйстве в период 2012–2016 гг. в качестве жеребца-про- изводителя и при этом за пределы хозяйства не вывозился.
При анализе эпизоотологической ситуации была установлена массовая гибель диких грызу- нов (мелкие мышевидные грызуны, дикие хомя- ки, суслики), трупы которых обнаруживались на протяжении июля-августа на территории частной конюшни, а впоследствии и гибель всех кошек, живших при конюшне.
У жеребца проявилась хромота 4/5 степени на левую тазовую конечность, при осмотре был обна-
ружен диффузный отек в области путового сустава левой тазовой конечности, горячий и болезненный при пальпации. Ректальная температура животно- го составляла 39 °С, пульс – 42 уд/мин, дыхание – 12 дд/мин. Проведение диагностической пункции путового сустава выявило скопление большого ко- личества синовиальной жидкости водянистой кон- систенции от бледно-желтого до прозрачного цве- та. Внутрисуставная диагностическая анестезия путового сустава дала положительный результат. После чего было назначено медикаментозное ле- чение острого асептического артрита путового су- става. Лечение дало положительный результат, и уже через два дня наблюдалось улучшение общего состояния, снижение степени хромоты до 1/5.
На фоне выздоровления через неделю проя- вился рецидив, вновь появились признаки артрита на обоих путовых суставах тазовых конечностей и перемежающаяся хромота преимущественно опор- ного типа на тазовые конечности. Была продолже- на схема лечения, которая дала положительные результаты – снизилась степень хромоты.
Результаты проведенных гематологических исследований свидетельствуют о лейкоцитозе с преобладанием гранулоцитов, лимфоцитопе- нии, снижении палочкоядерных форм, увеличе- нии количества сегментоядерных нейтрофилов. Также было установлено снижение СОЭ. После проведенного лечения показатели АЛАТ, обще- го билирубина были выше нормы, а кальция и натрия не соответствовали физиологическим показателям. Через месяц после лечения была проведена профилактическая дегельминтизация препаратом «Альвет» в дозе 3,75 г/100 кг, а за- тем через неделю проведен повторный курс ан- тибиотикотерапии с использованием комплекс- ного антибактериального препарата Пен-Стреп (Norbrook), 1 мл которого содержит 200000 МЕ бензилпенициллин-прокаина и 200 мг дигидро- стрептомицин сульфата. Схема лечения включа- ла применение препарата в дозе 20 мл внутри- мышечно один раз в сутки в течение 5 дней.
В соответствии с планом противоэпизоотиче- ских мероприятий при проведении лабораторных исследований у жеребца была установлена поло- жительная реакция на бруцеллез в РА по Райту в разведении 1:100 МЕ (2 креста), тогда как в РСК и РБП был получен отрицательный результат.
При исследовании проб мочи, кала, смывов из прямой кишки микроскопическим и бактерио- логическим методами на иерсиниоз был получен отрицательный результат, что позволило исклю- чить данную инфекцию.
Для осуществления дифференциальной ди- агностики было проведено повторное иссле- дование крови на бруцеллез с использованием серологического и ПЦР-исследования, сероло- гического метода на туляремию и иерсиниозы в
ФБУН «Омский НИИ природно-очаговых инфек- ций» Роспотребнадзора.
В результате дополнительных исследований была получена отрицательная реакция (РНГА) на иерсиниоз (серовары 03 и 09), получена от- рицательная реакция на бруцеллез (ПЦР, РСК). При исследовании сыворотки крови с исполь- зованием РНГА были определены антитела к возбудителю туляремии, при этом титр антител составил 1:320.
Патолого-анатомические изменения. В со- ответствии с пп. 3.2 и 12.3 Ветеринарных правил ВП-13.3.130296 был произведен убой животного на санитарной бойне. При этом в отдельных ор- ганах были выявлены патологические изменения. Печень увеличена, на поверхности – множествен- ные мелкие серовато-желтые очаги, соскоб на разрезе обильный. Селезенка резко увеличена в размерах, на поверхности имеются мелкопятни- стые кровоизлияния, консистенция органа тесто- ватая, края закруглены. На разрезе пульпа тем- но-вишневого цвета, при этом соскоб обильный. Мезентериальные лимфатические узлы увеличе- ны, отечны, с участками кровоизлияний и некроза. На серозной оболочке тонкого кишечника и бры- жейке точечные кровоизлияния. Продукты убоя были направлены на утилизацию.
Выводы
-
Заражение жеребца туляремией предпо- ложительно наступило алиментарным путем при поедании кормов, контаминированных экскрета- ми грызунов бактерионосителей.
-
У жеребца наблюдалось латентное тече- ние болезни, при этом ведущими клиническими симптомами были: кахексия при нормально со- храненном аппетите, артрит путовых суставов тазовых конечностей и субфебрильная темпера- тура тела.
-
Патолого-анатомические изменения при туляремии у лошади соответствовали алимен- тарному пути заражения.
-
Применение серологического исследования (РНГА) позволило установить диагностические ти- тры антител на туляремию у лошади (1:320).
1. Kudryavceva T.Yu., Popov V.P. [i dr.]. Epidemi- ologicheskiy i epizootologicheskiy analiz si- tuacii po tulyaremii v Rossiyskoy Federacii v 2016 g., prognoz na 2017 g. // Problemy osobo opasnyh infekciy. 2017. № 2. S. 13–18.
2. Yurov K.P., Zablockiy V.T., Kosminkov N.E. Infekcionnye i parazitarnye bolezni lo- shadey. M.: Zoomedlit, 2010. S. 142–145.
3. Guseva E.D., Dudnikova N.S. Tulyaremiya. Vladi- mir: Izd-vo OKNII i MC VNIIZZh, 2001. 40 s.
4. Olsuf'ev N.G., Dunaeva T.N. Prirodnaya ochagovost', epidemiologiya i profilaktika tulyaremii. M.: Medicina, 1970. 271 s.
5. Olsuf'ev N.G. Taksonomiya, mikrobiologiya i laboratornaya diagnostika vozbuditelya tu- lyaremii. M.: Medicina, 1975. 192 s.
6. Ellis J. Tularemia / J. Ellis, C.F. Oyston, M. Green, R.W. Titball II Clin. Microbiol. Rev. 2002. Vol. 25. P. 631–646.
7. Petersen J.M. Laboratory analysis of tularemia in wild-trapped, commercially traded prairie dogs, Texas, 2002 / J.M. Petersen, M.E. Schrief- er, L.Carter [et al.] // Emerg. Infect. Dis. 2004. Vol. 10, N. 3. P. 419–425.
8. Abd H., Johansson T., Golovliov I. et al. Surviv- al and growth of F.tularensis in Acanthamoeba castellanii // Appl. Environ. Microbiol. 2003. V. 69, № 1. P. 600–606.
9. Selezneva A.A. Gidrobiologicheskiy faktor v rasprostranenii tulyaremii // Tr. Tomsk. GU. Ser. Biologiya. 1953. T. 125. S. 255–260.
10. Selezneva A.A. Rol' rucheynikov, mol- lyuskov i lyagushek v dlitel'nosti zarazheniya Bacterium tularense protochnyh vodoemov // Voprosy kraevoy patologii, fitoncidov i proizvodstva bakpreparatov. Tomsk: Poli- grafizdat, 1953. S. 94–96.
11. Zuevskiy A.P., Panova N.S. Ob inficirovanno- sti gruntovyh vod vozbuditelem tulyaremii // Aktual'nye problemy profilaktiki tulyare- mii: tez. dokl. vsesoyuz. konf. (15–17 oktyabrya 1991 g., g. Simferopol'). M., 1991. S. 70–71.
12. Vershinin N.M., Mironch Yu.V., Mizitova L.A. [i dr.]. K ekologii F. tularensis v stepnom ochage tulyarek Yugo-Vostochnogo Zabaykal'ya // Aktu- al'nye problemy profilaktiki tulyaremii: tez. dokl. vsesoyuz. konf. (15–17 oktyabrya 1991 g., g. Simferopol'). M., 1991. S. 32–33.
13. Kondrahin I.P., Kurilov N.V., Malahov A.G. [i dr.]. Klinicheskaya laboratornaya diagno- stika v veterinarii: sprav. izd. M.: Agro- promizdat, 1985. 287 s.
